Expresión y purificación recombinante de una L-asparaginasa bacteriana en levadura (Pichia pastoris).

Abstract

La L-asparaginasa (ASNasa) es una proteína de gran importancia, utilizada principalmente como biofármaco para el tratamiento de leucemia linfoblástica aguda (LLA). Sin embargo, las versiones actualmente disponibles en el mercado generan diversos efectos adversos, tales como alergenicidad e inmunogenicidad por su origen bacteriano (E.coli y Dickeya chrysanthemi). Debido a lo anterior, la FDA aprobó el uso de una nueva versión de la ASNasa de E.coli recubierta con el polímero sintético poli-etilenglicol (PEG). Pero, esta versión también presenta problemas de inmunogenicidad. Por ello, la exploración de estrategias alternativas para la obtención de L-ASNasas menos inmunogénicas se hace indispensable. Recientemente, se publicó la construcción de una levadura genéticamente modificada con el gen asnB de D. chrysanthemi, que codifica para ASNasas glicosiladas; planteando una nueva posibilidad para obtener ASNasas menos inmunogénicas, ya que el proceso de glicosilación emula la pegilación, recubriendo la ASNasa con oligosacáridos naturales. Este trabajo tiene como objetivo la expresión y purificación de una ASNasa recombinante de bacteria en la levadura Glycoswitch_pJAG-s1_asnB de Pichia pastoris.