Condiciones experimentales para la obtención de registros electrofisiológicos de ovocitos de anfibios con la técnica Patch clamp

Abstract

La mayoría de este tipo de trabajos se han realizado en ovocitos de Xenopus laevis, rana surafricana perteneciente a la familia PIPIDAE, de hábitos acuáticos y con la técnica voltage clamp. Sin embargo, al ser esta especie de zonas templadas presenta problemas y elevados costos para el adecuamiento de un microhábitat que conllevase a producción de ovocitos de calidad. Además este modelo presenta en nuestro medio, problemas por la importación de especimenes. Bajo estas circunstancias es de vital importancia para el desarrollo de estudios de canales iónicos tener varios modelos experimentales de fácil adquisición en nuestro medio donde se puedan obtener los ovocitos. La rana Chaunus marinus es miembro de la familia BUFONIDAE, nativa de Centro y Suramérica siendo también plaga en varios lugares del mundo como Australia. Es de hábitos terrestres con características similares en tamaño y peso a X. laevis además de presentar una gran producción de ovocitos de hasta 32000 (Cochran & Goin, 1970; Zug & Zug, 1979; Acosta-Galvis, 2000). Estas características hacen de C. marinus una especie ideal para ser modelo experimental y además una fuente nativa de ovocitos para estudios electrofisiológicos. Vargas et a/.(2004) demostraron que ovocitos de C. marinus son un buen modelo para estudios de expresión de canales iónicos y registros con voltage clamp. Sin embargo, este organismo se desarrolla en un medio ambiente muy diferente a las condiciones ambientales de altura, temperatura y presión atmosférica que presenta Bogotá. Por tanto en el laboratorio de fisiología animal de la Universidad Nacional de Colombia, Sede Bogotá, hace 1 año se está montando una colonia de C. marinus pero no se han establecido las mejores condiciones para su mantenimiento en términos de dieta, temperatura, pH y otros. En el caso de estudios de electrofisiología celular para el caso de C. marinus solo se han realizado con la técnica de voltage clamp con dos electrodos y hay muy pocos estudios en X. laevis con patch clamp. Por tanto en el presente trabajo se buscó optimizar las condiciones para el mantenimiento de C. marinus en cautiverio y optimización de las condiciones de extracción de ovocitos y se inició la estandarización de registros de patch clamp en ovocitos